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植物细胞骨架的光学显微镜观察

2020-09-15 | 来源:
一、实验目的了解细胞骨架的结构特征及其制备技术。二、实验原理细胞骨架(cytoskeleton)是由蛋白质丝组成的复杂网状结构,根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持,细胞的生长、运动、分裂、分化,物质运输,能量转换,信息传递,基因表达等起到重要作用。当用适当浓度的TritonX-100处理细胞时,可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提,但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存,经用戊二醛固定,考马斯亮蓝R250染色后,可在光

一、实验目的了解细胞骨架的结构特征及其制备技术。二、实验原理细胞骨架(cytoskeleton)是由蛋白质丝组成的复杂网状结构,根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持,细胞的生长、运动、分裂、分化,物质运输,能量转换,信息传递,基因表达等起到重要作用。当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时,可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提,但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存,经用戊二醛固定,考马斯亮蓝 R250染色后,可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构,就是细胞骨架。三、实验器材、药品材料:洋葱鳞茎。器材:普通光学显微镜、滴瓶、容量瓶、试剂瓶、烧杯、载玻片、盖玻片、镊子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸。

药品:

(1)M缓冲液(加水定容到1000ml)

 

试剂名称 终浓度 每升加量
咪唑 50mmol/L 3.4g
氯化钾 50mmol/L 3.73g
氯化镁 0.5mmol/L 0.1g
EGTA 1mmol/L 0.38g
EDTA 0.1mmol/L 0.04g
巯基乙醇 1mmol/L 70ul
甘油 4.0mol/L 294.8ml

(2)磷酸缓冲液(pH 6.8):0.2 mol/L 磷酸缓冲液,用NaHCO3调至 pH6.8。

(3)1%Trion X-100:用M缓冲液配制.

(4)0.2%考马斯亮蓝R250:其溶剂为甲醇46.5ml,冰醋酸7ml,蒸馏水46.5ml。 (5)3%戊二醛:用0.2 mol/L磷酸缓冲液配。 四、实验步骤 1.取洋葱鳞茎切成大小约0.5cm2的块状,置磷酸缓冲液内浸泡3-10小时; 2.将浸泡后的鳞茎小块移动到1%的Trion X-100中处理30min; 3.用M-缓冲液洗3次,每次5分钟; 4.放入3%戊二醛中固定30分钟; 5.磷酸缓冲液洗3次,每次2min; 6.考马斯亮蓝染色30分钟; 7.水洗、铺展、装片、镜检。

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