荧光生物显微镜使用时应该注意哪些
荧光生物显微镜是由倒置显微镜和落射荧光显微镜组成,仪器配有长工作距离平场消色差物镜、大视野目镜。倒置观察时配置长工作距离平场相衬物镜和带相衬装置的特长工作距离聚光镜,荧光观察时可进行激发滤色片组切换。
该仪器具有成像清晰,视场广阔,结构紧凑,造型美观,操作舒适等特点,主要适用于培养瓶或培养皿内活体细胞和组织、流质、沉淀物等显微观察,也可应用于未染色透明活体和荧光切片的荧光显微观察。是生物学、细胞学、肿瘤学、遗传学、免疫学等研究工作的理想仪器。可供科研院所、医疗、防疫和农牧等部门使用。
荧光生物显微镜摄影对于记录荧光图像是非常必要的。由于荧光容易褪色和减弱,因此有必要对实时照相的结果进行记录。该方法与普通显微摄影方法基本相同。只需使用高速光敏膜,如ASA 200或以上或24。上面。由于紫外光对荧光的猝灭效应很大,如荧光标记物FITC等,在紫外光照射30s时,荧光亮度下降了50%,因此曝光速度太慢,无法捕捉到荧光图像。一般研究荧光显微镜有半自动或全自动显微摄影系统.
注意事项:
(1)严格按照操作说明书的要求制造的荧光显微镜,不改变该程序。
(2)检查应在暗室进行。进入暗室后,接通电源,点燃超高压汞灯5-15分钟。当光源发出强光并稳定下来时,眼睛有效适应暗室,然后开始观察标本。
(3)为防止紫外线对眼睛造成损害,调节光源时戴防护眼镜。
(4)每次检查时间为1~2h,超过90min,超高压汞灯的发光强度逐渐降低,荧光降低;紫外线照射3~5分钟后荧光降低。因此,不超过2~3h。
(5)荧光光学显微镜是有限的寿命,检查应聚焦在试样上,为了节省时间,保护光源。天热时,冷却风扇应添加,更换灯泡应该开始新的记录时间。后灯可以点亮,然后熄灭是,受灯充分冷却。每日数次,以避免火源。
(6)染色后,荧光会随着时间逐渐减弱。当试样在4℃下存放在聚乙烯塑料袋中时,可延迟荧光衰减时间,防止密封剂蒸发。
(7)荧光亮度的确定标准:一般分为四个级别,即"1"-NO或可见弱荧光。"++"-只能看到明显可见的荧光。"(+)+"-可见且明亮。