扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍(八)
碘化钾一醋酸铅导电法:
(A)碘化钾 20g
碘 0.2g
蒸馏水 l00ml
(B)氢氧化钾 4.08
醋酸铅 1.28
蒸馏水加至 l00ml
用时再稀释(1份母液+3份蒸馏水),值得注意的是:由于醋酸铅与空气接触易产生沉淀,故用前应经过滤。其处理操作流程见图10-11所示。
单宁酸导电法:单宁酸也称鞣酸,它能使蛋白质(包括许多络合物)沉淀,但氨基酸不沉淀。
此液的处理程序见图10-6所示。如经过2%四氧化饿固定(4℃)后,用2%~4%单宁酸加8%戊二醛处理1~4h(4'C),再用2%四氧化锇处理2~4h,不仅反差好,而且分辨率高。
用于组织导电的处理液还有硝酸银导电液,重铬酸钾导电液及硫卡巴(Thiocarbohgdragide)导电液等,这里不再叙述了。为取得较好效果,在进行组织导电液处理时,应注意以下事项。
处理后的样品,必须充分洗净,否则析出的结晶与样品反应,在电子束的轰击下分解而污染镜筒。
经导电液处理的样品,可保存于70%~80%的酒精或1:1的酒精甘油中,但时间不要超过几小时。
要用优良的导电胶粘贴样品,并要在半干湿状态下装台,避免自然干燥而变形。
组织导电方法主要是提高表面导电率,延缓电子充电速度和提高二次电子发射率,并能消除电子的充电效应,但不能将二次电子的发射率提高到像金属那样大,所以应抓紧时间观察,倍率也不宜放得太大。
组织导电不能完全解决样品的收缩变形问题,故应将几种方法结合起来使用,以便相互补偿。
对于外壳极薄,内含流体比例很大以及鳞翅目一类的昆虫(有腊质和脂类的表面)的样品,用组织导电处理时,效果很差,甚至不起作用,故不宜采用此法。
放电防止液处理法 有人把用于防止毛毯和衣服放电的放电防止液处理样品,也取得一定的导电效果。这种试剂的成份尚不清楚,但它是用表面活性剂和铵盐以及烷基苯磺酸配制成的混合液。其处理方法是在样品脱水过程的最后阶段用这混合液浸泡10~6Omin,再进行临界点干燥,即可装台观察。
温性化学法 这是根据Goldman和leit试用的方法,样品用醛类固定,经氨银处理后再用洗相定影液处理,由于有还原的银而赋予可导电性。但有人认为,这种处理会发生人为假像,故应用实例很少
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