倒置荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。
　　倒置荧光显微镜的作用有二：一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和损伤眼睛，二是选择并让特异的荧光透过，表现出专一的荧光色彩。两种滤光片必须选择配合使用。

       倒置荧光显微镜就其光路来分有两种

　　1.透射式荧光显微镜。激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野集光器，也可用普通集光器，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上.这是比较旧式的荧光显微镜。其优点是低倍镜时荧光强，而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱.所以对观察较大的标本材料较好。

　　2.落射式荧光显微镜。这是近代发展起来的新式荧光显微镜，与上不同处是激发光从物镜向下落射到标本表面，即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器，它与光铀呈45。角，激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片/双色束分离器/阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。

       在荧光显微镜中，荧光光源装置是提供一定波长的激发光使标本受激发射荧光，再通过显微镜的物镜，B镜系统使荧光图象放大以供观察，因此，一般来说，任何显微镜都可以用于荧光显微术。

　　滤色系统是荧光显微镜的重要部分，它由激发滤片(第一相片)和抑制滤片(第二滤只)所组成。前者提供一定波长范围的激发光，后者提供相应波长范围的荧光。其玻片通常用有色玻璃组成。其型号各国均不相同。

　　荧光显微镜激发滤片根据光源和荧光色突的特点，可分为露外光激发滤片，紫氏光激发滤片和紫外蓝光激发滤片。荧光显微镜所需激发滤片的厚度，主要根据所用显微镜激发方式而定，暗场荧光显微术要求激发滤片薄一些，明场时则要求厚一些，因为使用暗场时激发光不会按进入物镜，另外还得考虑标本情况和目的性，基本原则是以获得明亮的荧光相最好的背景衬托为准。

　　荧光显微镜抑制滤片的选择，主要根据激发滤只而定。其原则是以完全吸收激发光为目的，透过任何可见光(完全互补)以保护眼睛不受紫外光的刺激和损害。为与激发滤片相对应，抑制滤片也可分为：紫外光抑制滤片、紫蓝光抑制滤片和紫外验光抑制滤址。

　　上面介绍了荧光显微镜的滤色系统后，再来了解下荧光显微镜的照明选择根据什么来考虑。

　　荧光显微镜的照明可根据聚光器的构造和激发光的波长按以下三点考虑：

　　①从荧光像的反差要求来看，UV激发暗场聚光器照明最好。

　　②以像的亮度来考虑，BV激发滤光片暗场观察效率最高。

　　③UV激发滤光片暗场观察和BV激发暗场聚光器照明的特性，可看作介于这两种照明方法之间，但前者滤光片暗场的性质较强，显示图像较明亮，反差小;后者因保留暗场光路的性质，故显示图像较暗，而反差有所改善。当实际使用荧光显微镜时，应采用最适合标本要求的照明法进行观察。