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FV1000-IX81激光扫描共聚焦显微镜常见问题二

2018-08-19 | 来源:
激光激发肯定比汞灯激发荧光强吗?不一定,首先激光是单色光,如488nm,而汞灯下,有一定宽度的波长范围,如470-495nm,激发波长不一样,得到图片的效果不一样;其次,激光下采集荧光用共聚焦模式,样品层切得比较薄,而汞灯下用CCD采集图片,样品层切得比较厚。因此看弱荧光,经常是激光不如汞灯下看得更好。共聚焦拍照与普通荧光显微镜拍照有什么不同?共聚焦用激光做光源,光电倍增

激光激发肯定比汞灯激发荧光强吗?

不一定,首先激光是单色光,如488nm,而汞灯下,有一定宽度的波长范围,如470-495nm, 激发波长不一样,得到图片的效果不一样;其次,激光下采集荧光用共聚焦模式,样品层切得比较薄,而汞灯下用CCD采集图片,样品层切得比较厚。因此看弱荧光,经常是激光不如汞灯下看得更好。

共聚焦拍照与普通荧光显微镜拍照有什么不同?

共聚焦用激光做光源,光电倍增管做检测器,逐点扫描,对应每个像素其能量比较高;汞灯虽然总功率高,但属于场照明,对应每个像素的能量并没有激光高。共聚焦有针孔,可以排除焦平面上焦点以外及非焦平面杂散光的影响,因此空间分辨率提高,但因为是每个像素每个像素逐点扫描,采集较慢,一张图并不是同一时间采集的,时间分辨率不高;CCD拍照取的是样品的同一时间。

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