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显微镜形态学观察细胞凋亡——显微镜检测法

2019-04-01 | 来源:
用透射电镜观察细胞凋亡可以用于:(1)可清楚地观察到细胞结构在凋亡不同时期的变化;(2)电镜形态学观察是迄今为止判断凋亡最经典、最可靠的方法,被认为是确定细胞凋亡的金标准。实验方法原理细胞凋亡发生时会出现一定的形态学特征,如胞膜有小泡生成,细胞固缩,核质浓缩,染色质凝聚,DNA降解,胞膜最终形成许多凋亡小体,然后被邻近的巨噬细胞所吞噬。实验材料H

用透射电镜观察细胞凋亡可以用于:(1)可清楚地观察到细胞结构在凋亡不同时期的变化;(2)电镜形态学观察是迄今为止判断凋亡最经典、最可靠的方法, 被认为是确定细胞凋亡的金标准。

实验方法原理细胞凋亡发生时会出现一定的形态学特征,如胞膜有小泡生成,细胞固缩,核质浓缩,染色质凝聚,DNA降解,胞膜最终形成许多凋亡小体,然后被邻近的巨噬细胞所吞噬。
实验材料

Hela细胞Jurkat细胞

试剂、试剂盒

蒸馏水盼蓝

仪器、耗材

光学显微镜倒置显微镜荧光显微镜共聚焦激光扫描显微镜透射电子显微镜

实验步骤

利用光学显微镜,借助相应的染色方法,可以观察细胞凋亡时会出现的一系列形态特征。常用的染色法包括台盼蓝、吖啶橙 / 溴化乙啶(AO/EB)、Giemsa 和 HE 法等。在光学显微镜下可以观察到核固缩、质浓缩和凋亡小体等典型的凋亡现象。

电镜形态学观察法是一种比较经典、可靠的方法,被认为是确定细胞凋亡的金标准。电镜下凋亡细胞表现为染色质凝集、核浓缩、核裂解、胞浆收缩和胞膜具有发泡现象及凋亡小体出现等。

注意事项

形态学方法的不足之处是它只能定性,不能有效的定量,而且判定时难免存在主观性,故常作为其他检测方法的基础。

其他

细胞发生凋亡或坏死,其细胞DNA均发生断裂,细胞内小分子量DNA片断增加,高分子DNA减少,胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有 规律的发生在核小体之间,出现180-200DNA片断,而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱断,利用此特征可以确定群体细胞的死亡,并可与坏死细胞区别。 来源于《细胞凋亡检测的方法的研究进展》生物技术通报杂志。

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