光学显微镜对玻片厚度的要求
麦克奥迪显微镜脱水与样品附着:由于多次离心使细胞丢失,光学显微镜因此最好先将细胞附着在玻片或塑料片表面,使细胞随同该玻片或塑料片一起脱水、干燥。光学显微镜对玻片厚度的要求为使细胞能附着在玻片或塑料片,需先在玻片或塑料片上铺设一层膜,铺膜方法如下:
(1)光学显微镜最简单的方法是铺一层薄的聚乙烯醉缩甲醛(formvar )膜。将洗净的玻片在(0.5-1)%聚乙烯醉缩甲醛氯仿溶液中浸葵,待氛仿挥发后玻片上呈现一层白膜,将玻片在抓仿中振荡几次使膜变薄即可用。
(2)将0.1纬多聚L-赖氨酸(制备时将1mg多聚赖氨酸溶于l ml过滤后的水中)滴在洗净的玻片上,待液滴展开后在450C供箱中干燥。此种方法最好,因为多聚L-赖氨酸带正电荷,能使较多的表面带负电荷的细胞附着。
(3)麦克奥迪显微镜将血浆和甘油各以(30--40)%,光学显微镜对玻片厚度的要求和((3-5)%的比例加到蒸馏水中,成为甘油蛋白液。将该液滴在洗净的玻片上,光学显微镜展开并烘干。将铺好的蛋白膜浸入2%戊二醛中使蛋白固定,洗净后干燥可备用。使用前将血浆滴在该蛋白膜上使之“活化”, 30分钟后用缓冲液冲洗,便可直接应用。
数码显微镜将固定与清洗后的细胞用过滤后的水制成浓度适宜的细胞悬液,光学显微镜悬滴在已铺好膜的玻片或塑料片上,在湿润、低温(40C)环境中放置(30-120)分钟,使细胞附着到膜上。用细镊子夹起玻片在清洁的双蒸水中振荡,光学显微镜洗去未附着的细胞。光学显微镜对玻片厚度的要求偏光显微镜然后迅速放入盛有50%丙酮〔或乙醉)的器皿中。脱水过程是将玻片每隔约3分钟,依次放入浓度递增的丙酮或乙醉中,光学显微镜或在放玻片的器皿中不断增加脱水剂浓度。据作者所在实验室经验,后一种操作比较方便。光学显微镜具体做法可每隔3分钟将器皿中的脱水剂吸出一半,再加入浓度为100%的等量脱水剂。经过5-6次操作,光学显微镜对玻片厚度的要求显微镜价格器皿中脱水剂浓度达0.5%以上,细胞脱水成功。临界点干燥后将玻片或塑料片用导电胶粘于样品墩上进行金属镀膜。利用第三种方法铺设的膜附着细胞也有方便之处。光学显微镜可将经低浓度戊二醛固定后的细胞悬滴在“活化”后的蛋白膜上,光学显微镜对玻片厚度的要求放置10分钟,将玻片或塑料片浸于2%戊二醛中,30分钟后用过滤双蒸水冲清,再按上述方法脱水、干操及金属镀膜。
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