实验方法原理 利用暗视野显微镜可以进行活细胞观察，但是看不淸细胞的内部结构。而20世纪40年代出现的相差显微技术却使人们不仅能观察活细胞的形态，而且还能看到细胞的内部结构及其随时间变化的过程，为此，F.Zemike获得了1953年的诺贝尔物理学奖。

光线通过比较透明的标本时，光的波长（颜色）和振幅（亮度）都没有明显的变化，因此，用普通光学显微镜现察未经染色的标本（如活的细胞）时，其形态和内部结构往往难以分辨，然而，由于细胞各部分的折射率和厚度的不同，光线通过这种标本时，直射光和衍射光的光程就会有差别。随着光程的增加或减少，加快或落后的光波的相位会发生改变（产生相位差）。光的相位差人肉眼感觉不到，但相差显微镜能通过其特殊装置——环状光阑和相板，利用光的干涉现象，将光的相位差转变为人眼可以察觉的振蝠差（明暗差)，从而使原来透明的物体表现出明显的明暗差异，对比度增强，使我们能比较淸楚地观察到在普通光学显微镜和暗视野显微镜下都看不到或看不淸的活细胞及细胞内的某些细微结构。

图1 相差显微镜的成像原理及装置图

实验材料 酿酒酵母水浸片枯草杆菌水浸片

仪器、耗材 相差显微镜聚光器相差物镜显微镜合轴调节望远镜绿色滤光片载玻片盖玻片

实验步骤

1.  将显微镜的聚光器和接物镜换成相差聚光器和相差物镜，在光路上加绿色滤光片。

2.  聚光器转盘刻度置“0”，调节光源使视野亮度均匀.

3.  将酿酒酵母水浸片或枯草芽孢杆菌水浸片置于载物台上，用低倍物镜（10X）在明视野配光并聚焦样品。

相差显微镜镜检对载玻片、盖玻片的要求很离，载玻片厚度应在1.0 mm左右。若过厚，环状光阑的亮环变大，过薄则亮环变小；载玻片厚薄不均，凹凸不平，或有划痕、尘埃等也都会影响图像质量。而盖玻片的标准厚度通常为0.16-10.17 mm，过薄或过厚都会使像差、色差增加，影响观察结果。