体视荧光显微镜使用方法及注意事项
体视荧光显微镜是显微镜的一种,这种显微镜以紫外线为光源,通过观察被测物的荧光图像对物体作出判断。目前,荧光体视显微镜是活体动物体内荧光成像技术的核心技术,被用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。体视荧光显微镜是生物、工业检测等领域进行定性和定量研究的可靠工具之一。
体视荧光显微镜的使用方法:
使用前,需检查实验室工作环境,确保环境符合仪器说明中的使用环境标准后依照规范操作进行操作。
1.将材料片放在载物台上,开启荧光显微镜稳压器.然后按下启动组点燃紫外灯,需要注意的是,点燃紫外灯后十五分钟内不能关闭,关闭紫外灯后三分钟内不得再启动。
2. 将激发滤光片转至v,分色片调到v,选用495或475nm阻挡滤光片;选用uvFL40、uvFL100荧光接物镜镜检。
3. 在玻片上加无荧光油,依次用“40x”“100 x”调焦镜检,呈现荧光。
4. 因荧光物质受紫外光照射时随时间的增长荧光逐渐变弱,因此镜检时应经常变换视野。
注意:同样可以使用uvFL10或uvFL20低倍镜镜检材料,用低倍镜观察时不加无荧光油。
注意事项:
(1)严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作,不要随意改变程序。
(2)应在暗室中进行检查。进入暗室后,接上电源,点燃超高压汞灯5~15min,待光源发出强光稳定后,眼睛完全适应暗室,再开始观察标本。
(3)防止紫外线对眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜。
(4)检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱;所以,多不得超过2~3h。
(5)荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检查,以节 省时间,保护光源。天热时,应加电扇散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时,须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。
(6)标本染色后立即观察,因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸发。
(7)荧光亮度的判断标准: “-”—无或可见微弱荧光。“+”—仅能见明确可见的荧光。“++”—可见有明亮。
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