共聚焦显微镜的故障排除

在某些实验过程可能不明原因的无法得出满意结果，此时，一个很好的试验方法是用荧光显微镜检查标本，如果在荧光显微镜下肉眼可看到荧光，则在共聚焦系统，其荧光信号应很亮。如果在共聚焦系统看不到图像，一方面要检查使用的荧光控针与仪器的激发波长是否匹配，另一方面应使用己知的测试样本全部检查共聚焦系统各部分。图像的数字文件应适当编号，并为具体的实验者所专用。尤其是在进行图像命名时尽量少用姓氏作为文件名，这样很容易混乱和重复。而且每幅图像应详细记录各种采集参数，包括激光功率、增益、背底水平、针孔直径、zoom值和使用的物镜。

在使用共聚焦显微镜实验本身的问题常常是由试剂的降解引起的，应进行一系列的诊断测试。实验使用的试剂zui好自己亲自新鲜配制。抗体应等分为小份后分别储存。许多试剂可以重复使用，而且并不影响实验结果，尤其对于昂贵的试剂和稀有的试剂更应注意节约和尽量重复使用。

有时实验失败可能是由于抗体降解引起的。陈旧的标本可造成背底荧光的增加，从标记的第二抗体分离出来的荧光色素和弥散到组织中的荧光色素，可以引起荧光渗透。在尽可能的情况下，应使用新鲜制备的标本观察。有时改变荧光控针的浓度和分布也对获得理想的实验结果大有帮助。如荧光黄渗透到罗丹明通道，可将荧光团调使罗丹明位于较强的通道，因为荧光黄的激发光谱有一个尾部位于罗丹明的激发波长内。