共聚焦显微镜之转盘式扫描与单点扫描的区别
共焦显微镜从产生至今获得了巨大的发展,扫描方式从最初的狭缝扫描方式(扫描速度较快,图像分辨率不高),到阶梯式扫描技术(提高了图像分辨率,标本制备要求太高),再到驱动式光束扫描器(扫描速度较快,符合共聚焦原理)。至今又产生了新的类型,如针孔阵列盘式(简称转盘式)激光共聚焦显微镜。
转盘式激光共聚焦显微镜是为了解决快速变化过程的共聚焦检测问题而提出的,是目前活细胞共聚焦最先进的技术,最大的特点是速度快,灵敏度高,光漂白和光毒性水平低,最适合活细胞、快速、6D扫描研究。其核心是增强型微透镜双转盘专利技术,由日本Yokogawa Electric公司发明,包括微透镜转盘与针孔转盘同步旋转,最大程度上保证了透光率并允许高速多点扫描,结合高灵敏度CCD使用时极大地提高了成像速度,同时降低样本的光漂白和光毒性,是世界上公认的活细胞成像的金标准。Yokogawa公司是世界上唯一的转盘共聚焦扫描技术的提供商,所有知名厂家如Andor,PE等都采用Yokogawa公司的转盘共聚焦扫描单元去做系统的整合。
转盘式扫描与传统单点扫描的区别:
1、单点扫描,单点激光扫描头逐点逐行的扫描样品,以PMT采集信号,就是常见的点扫描共聚焦--即传统激光共聚焦系统。
2、转盘式是多点同步扫描,以Yokogawa的转盘扫描头为例,转盘上分布有20000个螺旋排列的针孔,而激光光源覆盖约2000个针孔的范围(即扫描区域),借助转盘的转动(针孔位置随之改变),实现对样品的完整扫描。相当于2000个激光点同步照射样品,同步激发,CCD上同步采集,所以扫描速度非常的快。
3、微透镜增强型的双转盘式是目前活细胞共聚焦最先进的技术,它大大提高了激光的利用率,扫描速度快,灵敏度高,光漂白和光毒性水平低,最适合活细胞、快速、6D扫描研究。
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