一、 实验目的

（1） 了解透射 电子显微镜 的主要结构、功能与基本工作原理；

（2） 了解扫描 电子显微镜 的主要结构、性能与基本工作原理。

二、 实验步骤（讲解演示）

1）透射电镜样品超薄切片常规制作规程

1．取材：根据实验目的取材，要求部位准确，体积小于2mm3

2．醛类固定：用2%-3%的戊二醛固定2小时；

3．清洗：用磷酸 缓冲液 清洗3次，每次10min；

4．锇酸固定：用1%-2%的锇酸固定2~3小时；

5．清洗：用磷酸 缓冲液 清洗3次，每次10 min；

6．脱水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min，再用100%乙醇脱水3次，每次30min；

7．置换：用环氧丙烷或丙酮置换3次，每次30min;

8.浸渍：10hr以上，浸渍过程如下：

①丙酮：包埋剂=3：1的浸渍液浸渍（动物样品1hr，植物样品2~3hr）；

②丙酮：包埋剂=1：1的浸渍液浸渍（动物样品1hr，植物样品2~3hr）；

③丙酮：包埋剂=1：3的浸渍液浸渍（动物样品4hr，植物样品12~24hr）；

④纯包埋剂浸渍（动物样品4hr，植物样品12~24hr）；

9．包埋：将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中；

包埋剂配方中Epon812，MNA，DDSA，DMP-30的比例见附表

10． 聚合：将包埋板置于40C、60℃条件下各聚合48hr；

11．修块：将包埋头修成梯形，且样品表面积小于0.2mm×0.2mm

12．超薄切片：切片厚度50-90nm

13．染色：铀染色 5~15min 清洗

铅染色 5~10min 清洗

2）扫描电镜样品常规制备规程

1．取材：根据实验目的取材，要求部位准确

2．清洗：用磷酸缓冲液反复清洗样品表面的灰尘、杂质等附着物

3．固定：用2%-3%的戊二醛固定2小时

4．清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10 min

5．脱水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min，再用100%乙醇脱水3次，每次30min；

6．置换：用叔丁醇置换3次，每次30min

7．干燥：用冷冻干燥仪干燥样品

8．粘样：用双面胶带将样品粘到样品台上

9．镀膜：用离子溅射仪给样品镀10nm金膜