伴随着科技的发展进步，我们的观测手段与方式也愈发的多了，荧光显微镜观测目标蛋白的首选方法，其基本原理是凭借荧光剂，使细胞变成一个类似于自发光的物体，便于观察。在安排样本中，意图基因无法进行克隆，则需要用免疫荧光染色等其他技术手段来调查意图蛋白。为此，就需要使用抗体，这些抗体连接各种不同的荧光染料，直接或间接地与相应的靶结构相结合。此外，凭借荧光染料，荧光显微镜技术不只局限于蛋白质，它还可以对核酸、聚糖等其他结构进行染色，即使钙离子等非生物物质也可以检测出来。本文就对几种常用的荧光剂进行了详细的介绍。

　　免疫荧光 (IF)

　　在荧光显微镜技能中，能够经过两种方法调查到你的意图蛋白：运用内源荧光信号，即经过克隆手法，用遗传学办法将荧光蛋白与意图蛋白相连;或运用荧光符号的抗体特异性结合意图蛋白。有些生物学问题采用第二种办法会更有用或更有必要。比如，组织学样品无法运用荧光蛋白，因为通常来说，标本都是从无法保存荧光蛋白的生物体中获取。此外，当有一个有功用的抗体可用时，免疫荧光法会比荧光蛋白技能快许多，因为后者必须先克隆意图基因再将DNA转染到恰当的细胞中。荧光蛋白的另一项下风在于其自身归于蛋白质。因此，细胞内的这些荧光蛋白具有特定的蛋白质特性，其会导致附着的意图蛋白质发生功用紊乱或呈现误释的情况。然而，荧光蛋白技能仍然是调查活细胞的首选办法。

　　免疫荧光法运用了抗体能够和相应抗原特异性结合的这个特性，对此它还有两种不同的表现形式。最简略的方法是运用可与意图蛋白相结合的荧光符号抗体。这种办法被称为“直接免疫荧光法”。

　　在许多情况下，咱们能够运用两种不同特性的抗体。第一种抗体能够结合意图蛋白，但其自身并未进行荧光符号(一抗)。第二种抗体自身就带着荧光染料(二抗)，而且能够特异性结合一抗。这种办法被称为“间接免疫荧光法”。这种办法存在诸多优势。一方面，它会发生放大效应，因为不只一个二抗能够与一抗相结合。另一方面，没有必要一直用荧光染料符号意图蛋白的每个抗体，但能够运用市售荧光符号的二抗。免疫荧光中广泛运用的荧光染料包含 FITC、TRITC 或一些Alexa Fluor?染料，下文均有提及。

　　荧光显微镜观测目标蛋白的首选方法，通过上述文章的描述，相信你大概有个了解。若有其他疑问，欢迎咨询我们。