植物组织根茎叶真菌的观察
多用途明暗场数码生物显微镜广泛用于生物学、细胞学、组织学、药物化学等研究所工作,在医学上可进行三大常规检查,在学校实验室可供教学之用。今天来说说,植物组织根茎叶真菌的观察详细制样过程。
1.固定
1)采集样品,用缓冲液冲洗,然后将样品置于2.5% 戊二醛缓冲固定液(电子显微镜纯度)中。 将植物组织抽真空,使固定液进入细胞(叶子等肉眼可见,浸泡在固定液中) ,并在4c 处过夜固定;
2)将缓冲液洗涤2至3次,每次5分钟;
3)固定的1%或2%OsO?在缓冲液固定剂加入到样品中,在室温或固定的4℃3-4小时;
4)冲洗缓冲液2-3次,每次5分钟
2. 脱水
使用30%-50%-70%-90%-95%-100%的酒精对样品进行梯度脱水,每步20至30分钟;100%的酒精需要重复2-3次,以确保完全脱水;
3. 渗透
用无水环氧丙烷取代醇或丙酮,20-30分钟;树脂浸渍。 (取决于环氧树脂物种的配方和选择,严格按照树脂的配合比和固化剂混合,并充分搅拌)的每步时间比率分别为:
环氧丙烷(丙酮):环氧树脂=3:1,3小时(室温)
氧化丙烯(丙酮):环氧树脂= 1:3,3小时 - 过夜(室温)
纯环氧树脂:24-72小时(室温)
上述每个步骤都在旋转搅拌机上摇动和旋转,以加速渗透。
4. 包埋与聚合
炉的1.5%的纯环氧树脂比例的溶液中加入催化剂的2%,并混合或注入到模具中嵌入胶囊中,样品然后放置在期望的定向模具或嵌入在树脂胶囊,然后将其置于聚合之后。推荐?12小时35℃,然后通过45℃下12小时,然后60℃24小时,以继续进行聚合。 (斯珀尔树脂需要70℃24小时,以进行聚合)。
5.切片、染色(略)
通过上面的步骤对植物根茎叶处理过后,就可以在生物显微镜下观察了。
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