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倒置荧光显微镜使用时可能需要的问题有哪些？
2021-04-19 | 来源：
倒置荧光显微镜，是指与一般显微镜相比，其物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来，由荧光附件与显微镜有机结合构成的显微镜。激发光从物镜向下落射到标本表面，被反射到物镜中并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，经双色束分离器使激发光和荧光分开而成像。物镜和聚光镜的工作距离很长，能直接对培养皿中的被检物体进行显微观察和研究。倒置荧光显微镜使用时可能需要的问题有哪些？</di
倒置荧光显微镜，是指与一般显微镜相比，其物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来，由荧光附件与显微镜有机结合构成的显微镜。激发光从物镜向下落射到标本表面，被反射到物镜中并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，经双色束分离器使激发光和荧光分开而成像。物镜和聚光镜的工作距离很长，能直接对培养皿中的被检物体进行显微观察和研究。
倒置荧光显微镜使用时可能需要的问题有哪些？
1、正确观察白光的步骤？
将标本置于载物台上，打开电源开关；将转盘聚光器调整到明视场，然后将环状光阑调整到z大光圈；从低倍镜开始观察。
2、相差环中BF/PHL/PH2等这些字母到底是什么意思？
倒置荧光显微镜本身是结合了荧光附件和相差显微镜的特点。那么在相差环中的这些字母分别代表了：PHL(4×0.13)、PH1(20×0.45)、PH2(40×0.6)、BF代表的是白光。所以如果我们观察的是荧光，前三种相差是都可以选择的。所谓的相差可以理解成是对于透明结构的放大处理，因为细胞本身内部结构是透明的，我们想观察细胞内部结构的时候就需要使用相差。
3、无论怎么调整细准焦螺旋，镜下的图像都不清楚？
这种情况下很可能是镜头不干净，可以用酒精棉擦拭一下镜面。另外高倍数的物镜镜头外也有一个旋钮，适当旋转这个旋钮也会使画面变得清晰。
4、正确观察荧光的步骤？
关闭室内的灯光，打开白光电源和汞灯电源，一般汞灯需要提前打开10分钟预热才能达到zui亮；关闭荧光shutter，用低倍镜找到细胞位置；关闭透射光按钮，打开荧光光路shutter，旋转荧光滤色转盘；电脑显示器中观察。
荧光光路shutter要zui后打开，zui先关闭，这样可以保护样本，避免过度的荧光猝灭。
5、如何维护汞灯？
汞灯在工作时会散发出较大的热量，因此要保持室内温度不要过高，具有良好的散热环境。一个汞灯的工作寿命一般是200个小时，但并不是使用时间越短，观察的越快，越能延长汞灯的寿命。相反的，如果工作时间越短，反而会让汞灯寿命减少的越快，所以要尽量减少开关的次数。
6、为什么目镜下观察到的图像只有一半儿？
出现这种情况的原因一般是CT环调整出现了问题。CT环位于目镜下方，也叫合轴调中目镜，有CT/O/S三个参数设置。CT对应的是光路对准了望远镜；O对应的是光路中没有物体；S对应的是光路中有遮光板。那么上述情况就是CT环这个螺旋位于CT和S两个参数之间。
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