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细胞研究用的显微镜分类和工作原理(二)

2020-06-29 | 来源:
细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜(图2-2,3,4)就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。图2-3落射式照明原理荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别:1、照明方式通常为落射式,即光源通过物镜投射于样品上(图2-3);2、光源为紫外光,波长较短,分辨力高于普通显微镜;3、有两个特殊

细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜(图2-2,3,4)就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

图2-3 落射式照明原理

荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别:

1、照明方式通常为落射式,即光源通过物镜投射于样品上(图2-3);  2、光源为紫外光,波长较短,分辨力高于普通显微镜;  3、有两个特殊的滤光片,光源前的用以滤除可见光,目镜和物镜之间的用于滤除紫外线,用以保护人目。

图2-4 荧光显微镜照片(微管呈绿色、微丝红色、核蓝色)

(三)、激光共聚焦扫描显微镜

图2-5 激光共聚焦扫描显微镜

图2-6 LCSM照片,蓝色为细胞核,绿色为微管

激光共聚焦扫描显微镜(laser confocal scanning microscope,图2-5、6)用激光作扫描光源,逐点、逐行、逐面快速扫描成像,扫描的激光与荧光收集共用一个物镜,物镜的焦点即扫描激光的聚焦点,也是瞬时成像的物点。由于激光束的波长较短,光束很细,所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力,大约是普通光学显微镜的3倍。系统经一次调焦,扫描限制在样品的一个平面内。调焦深度不一样时,就可以获得样品不同深度层次的图像,这些图像信息都储于计算机内,通过计算机分析和模拟,就能显示细胞样品的立体结构。激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态,也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量。

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