生物显微镜的成像原理（二）

　　三、显微镜照明系统

　　为了获得良好的工作效果，生物显微镜必须注意照明的正确使用。生物显微镜的照明方式按其用途可以分成3类。

　　1．用透射光照明。在医学、生物学检验上用的zui多zui广，一般在数值孔径小的低倍物镜，可采用一种zui简单的照明器，用一凹面镜（或平面镜），使白然光经凹面镜后被会聚在载物片的样品上。对于高倍镜或油浸物镜，必须采用专门的聚光器，位宽大的平行光束经集光镜后被会聚成与物镜孔径相适应的锥形光束，方能满足物镜分辨本领的需要。而另一方面也增加了样品的亮度。采用透射光照明，还有两种方法，一种是将光线聚焦在标本上，称作临界照明，如果光源表面亮度不均匀．则在载物片上也反映出来，如灯丝像等。在微型显微镜中，为了消除这一缺点，在案光器下面的蓝色滤光片的一面．采用磨砂而减少僚的亮度不均匀现象。另一种方法叫库勒照明，如图3—3所示。由光源发出的光先经过毛玻璃L，再经过透镜K把毛玻璃的像里在案光器下部的光栏J2处，集光器把光栏J1的像呈在物面上，并且把J2像呈在无限远，这种照明，即使光源本身亮度不均匀，而在标本上的照明也是十分均匀的。而且调整好J1的孔径，还可以减少杂散光的影响。

　　2。用于非透明体的照明。对于非透明体光线不能透射，这时只能从侧面斜射照亮标本，如图3—4所示。当用低倍物镜时，有一定的工作距离，可以从上边或旁边照射被观察物的表面，使漫射光进入物镜，这时不能用盖玻片，否则规则的反射光将进入物镜影响观察。因为是单向侧面照明，这样被观察的标本可能有些变形。为了纠正这一缺点，还可以把物镜放在环形光束中，采用全向照明。

　　3．用暗视场观察微粒的照明。在通常的阿贝集光器下面，加一个环形光阑，将中间光线遮住．仅使边缘光线进入集光，由于光线没有直接进入物镜，因此视场背景是暗的，可以做暗视场的透明体观察。这种照明对于线形或点形，细微结构透明体观察．如矽藻完皮、动植物的各种组织、血液和含有细菌的液体等有较好的效果，如图3—5所示。

　　应用暗视场集光器来观察标本，必须在夜间或暗室中进行，光源越强越好。用阳光直射、弧光灯或500支光电灯都行，但须使光线平行地射到反光镜上。这可在光源与显微镜之间安插一块凸透镜，或用500mL烧瓶盛10％硫酸饲溶液，将光源刚好放在焦点处即可。所用的接物镜的镜口率只宜在1.0左右，太高则看不清物像。新式接物镜管内多安装有小型光阑，可以随意改变镜口率的大小。

　　用普通生物显微镜也可以得到暗视场的效果：即将集光器卸下，并且把反光镜尽量歪在一边使反射后的光线不能直接射人接物镜，则可得到相类似的结果。此种方法所得的光线仅只能从某一方面照射，如图3—6所示。所以效果较差，而且只能在低倍镜中使用，在高倍镜和油浸系使用效果都不好。

　　如想光线能从各方面照射，而—时又无暗视物集光器，则可将普通明视场集光器稍加改变即可。即在集光镜下面加一黑色之光挡，把来自反光镜的光柱的中央部分遮掉，允许边缘简状光线进入集光镜。所遮掉的光的面积应等于接物镜的镜口率，只有这样才不致有光线直接射入接物镜，如图3—7所示。图中，斜线表示直穿的光线，虚线表示反射的光线。另外一个方法就是将集光镜上面一个透镜的下面中央部用黑漆涂掉或剪一块圆形黑色纸粘住即可，面积大小也应刚好等于接物镜的镜口率，这和用遮光板的作用是一样的。另外在接物镜上组透镜的上面，用适当大小的黑纸片遮去中心部的光线，或是在眼点处设法遮掉中心部光线．然后用光闹遮掉四周光线，也可得到较好的效果。要想得到良好的暗视场观察．必须配备整套暗视场装量为zui佳。

　　四、生物显微镜的盖玻片及载玻片

　　在360—780mm的光谱范围内，其光吸收应为zui小。在正常目视观察下，不应有任何斑点、气泡、条纹和夹杂物。此外，应消除应力，无放射背景荧光。

　　就其化学稳定性而言，对正常用于显微术中的浸液、溶剂、标本等，必须是化学惰性。　　盖玻片在光学设计时常作为物镜的一部分，和物镜一起消像差，因此其材料和厚度必须加以规定。