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详述共聚焦显微镜荧光探针的选择步骤及方法
2020-06-29 | 来源:
在用共聚焦显微镜进行的试验中,一些实验指标可以利用样品自身或外源性物质的自发性荧光进行检测,但大多数待测物质不具备可测荧光,需要采用荧光探针标记的方法使其具有可测定的荧光信号。那么,怎样选择共聚焦显微镜荧光探针呢?1、根据实验目的确定需要检测的指标一旦检测指标确定,则荧光探针的选择范围也随之确定。可见,实验中选择使用何种荧光探针是由实验目的决定的。例如,实验目的是研究发生房颤时心肌细胞内钙离子的变化情况,则可以确定待测物质为心肌细胞内的
在用共聚焦显微镜进行的试验中,一些实验指标可以利用样品自身或外源性物质的自发性荧光进行检测,但大多数待测物质不具备可测荧光,需要采用荧光探针标记的方法使其具有可测定的荧光信号。那么,怎样选择共聚焦显微镜荧光探针呢?
1、根据实验目的确定需要检测的指标
一旦检测指标确定,则荧光探针的选择范围也随之确定。可见,实验中选择使用何种荧光探针是由实验目的决定的。例如,实验目的是研究发生房颤时心肌细胞内钙离子的变化情况,则可以确定待测物质为心肌细胞内的钙离子,荧光探针的选择范围就限定为能够标记活细胞的钙离子探针。
2、确定可供选择的荧光探针的范围
对于新的实验物质或指标哦,如果实验目的不是探索新的荧光探针,则可以选择应用成熟的探针和标记方法。可以通过查找权威的文献或国内外知名试剂公司产品目录,确定可以标记待测物质的荧光探针种类或范围。
3、考察荧光探针的特性是否符合荧光样品的制备要求
荧光探针的特性直接影响着样品的标记和实验效果。因此在试验中选择荧光探针以及标记样品之前,要充分了解其荧光特性。需要考察的荧光探针的特性包括:
1.光探针与样品的反应特性
2.荧光探针的灵敏度及荧光强度
3.荧光探针标记后样品的光谱特性
4.荧光的稳定性
5.样品中多重荧光之间的相互影响
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