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荧光显微镜技术的原理

2018-07-31 | 来源:
如图2所示,在普通的荧光显微镜下,我们很难分清红色、绿色两种荧光分子标记的不同蛋白(如(a)(c)(e)所示);那图中的(b)(d)(f)又是如何实现红色、绿色两种蛋白分开呢?该图为纳观生物有限公司拍摄,我们就以该公司研发的SRiS超高分辨率成像系统为例,给大家介绍下随机光学重构显微技术的原理。该技术的原理是,通过特殊配置的成像缓冲液(Imagingbuffer)以及较高强度的激光,使样品在每一个瞬间都仅有少量随机、离散的单个

 如图2所示,在普通的荧光显微镜下,我们很难分清红色、绿色两种荧光分子标记的不同蛋白(如(a)(c)(e)所示);那图中的(b)(d)(f)又是如何实现红色、绿色两种蛋白分开呢?该图为纳观生物有限公司拍摄,我们就以该公司研发的SRiS超高分辨率成像系统为例,给大家介绍下随机光学重构显微技术的原理。

       该技术的原理是,通过特殊配置的成像缓冲液(Imaging buffer)以及较高强度的激光,使样品在每一个瞬间都仅有少量随机、离散的单个荧光分子处于发光状态(荧光分子开关, Photo-Switchable fluorophore),其他瞬间处于黑暗状态(如图3实时拍摄效果所示),通过拟合,找出每个发光荧光分子中心点的位置。重复拍摄多张图片之后,就可以把所有荧光分子的中心点位置叠加起来形成整幅图像,从而得到样品更多的细节,超分辨显微重构的结果不仅可以看到粗的纤维,还可以显示普通荧光显微镜下观察不到的极细纤维的精细结构(如图3重构结果所示)。

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