实验室荧光显微镜的标本制作方法与正确步骤
一、 玻片及盖玻片(Slide and Coverslips)
玻片及盖玻片质量必需很好而没有荧光,玻片厚度≦1.0mm 者便可用,玻片之清洗,必需以中性清洁剂洗净,再浸于含有3%HCl 之乙醇12~24 小时,然后再贮存于纯酒精。要用时,以清洁纱布擦净或火焰烘干。用完后可浸于水中,移去封埋物,再经清洁剂及重酪酸-硫酸混合物处置。
重酪酸一硫酸混合物之配法:
①粗制重酪酸钾300 gm
②20% 硫酸水溶液3000 ml
③运用珐琅质或陶质容器,先放入20% 硫酸水溶液,然后缓缓参加粗制重酪酸钾,以玻璃棒搅拌,此时会发热,俟冷却后运用。目前已有处置好的玻片出卖,运用上十分便当。
二、 组织切片(Tissue Sections)
组织切片愈薄愈好(4μ),假如切片太厚,则可能自体及非特异荧光增加,目前都用冷冻切片机(Cryostat) 来切,冷冻切片机包括冰冻柜(Refrigerated Cabinet),温度在0℃~-30℃ 之间,切片机(Microtome) 放在里面,将组织在-20℃ 冰冻10 分钟,就能够切,切下之薄片,以玻片捺下后在室温急速枯燥。制备好之切片必需尽可能马上固定及染色。假如切片必需储放短时间( 约1 周),则固定后密封储放于-70℃,要染色时,切片必需回温到室温方启开。
三、细胞培育法(Cell Culture Preparation)
细胞培育法普通用盖玻片在组织培育盘( 例如24 孔)或培育在玻璃片(Chamber Slide) 上,再和普通接种病毒一样,接种可疑病材乳剂,培育数天,取出,枯燥、固定、水洗,再用标示抗体染色以检查特异荧光。
四、涂抹法或捺压法(Smear and Impression Preparation)
所用玻片需很薄,普通用盖玻片代用,将所要检查之病材,如血液、组织液或其他病材,在玻片上涂抹或捺压,涂抹或捺压片在室温用吹风机或电风扇( 以冷风吹干),以甲醇或丙酮固定,放于密封标本箱于-20℃ 备染或马上染色。
五、固定(Fixation)
除了使组织固定于玻片外,另一方面亦可助抗原-抗体复合物之构成,例如把脂质溶解,使抗体抗原较易反响。普通用100%Methanol 在室温作用2分钟,或丙酮于-20℃ 下10 分钟来固定微生物抗原及病毒。
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