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物组织化学显微镜标本片制作方法_整体封藏法

2019-04-10 | 来源:
实验方法原理将小而扁平的检物材料全部封藏起来,所以用此法制作的玻片标本可显示出植物或植物某部分器官的整体。这种方法适用于微小或扁平的材料,例如丝状或叶状的藻类、菌类蕨类的原叶体抱子襄、纤小的苔鲜植物,以及被于植物的表皮、花粉粒、幼胚等幼小的器官。可以制成临时装片,也可以制成水久制片。实验材料检物材料试剂、试剂
实验方法原理

将小而扁平的检物材料全部封藏起来,所以用此法制作的玻片标本可显示出植物或植物某部分器官的整体。这种方法适用于微小或扁平的材料,例如丝状或叶状的藻类、菌类蕨类的原叶体抱子襄、纤小的苔鲜植物,以及被于植物的表皮、花粉粒、幼胚等幼小的器官。可以制成临时装片,也可以制成水久制片。

实验材料

检物材料

试剂、试剂盒

甘油染色剂蒸馏水

仪器、耗材

玻片

实验步骤

由于材料不同、研究的目的不同,以及所用的脱水剂、透明剂、封藏剂不同,整体封藏法有多种方法。

1. 甘油法

甘油法是最常使用的一种制片方法。甘油法是用甘油脱水和透明,并封藏于甘油中,方法简单并可保持植物的自然颜色。对于制作含有色素的材料(如绿藻)效果较好,必要时还可以进行染色,故可有染色和不染色两种制片法。以水绵为例,依据下列步骤可制成染色的和不染色的封片。

(1)不染色制片法

小采集新鲜水绵,用水洗净附着的泥土后,取少许丝状体放在小培养皿中,加多量的10%甘油。将滤纸盖于液面上,以防尘土落于其上。然后把培养皿放于较温暖的地方,使水分慢慢蒸发至纯甘油浓度,在此过程中,材料逐渐同时被脱水和透明了。

①用镊子取出少许水绵,放在载玻片中央展开,在显微镜下检查,如果材料没有收缩或变坏,使可进行装片,即在材料上滴一小滴纯甘油,将丝状体挑开,盖上盖玻片。甘油不可太多,如果甘油多到从盖玻片边缘溢出,就会影响下一步封藏,此时可将盖玻片拿开,用滴管将多余的甘油吸掉,重新加盖玻片。

②用较稠的加拿大树胶(也可以用火漆及其他易干漆封边)沿盖玻片四周封边。

(2)染色制片法

①洗净的水绵,放在标本管中,加入铬酸-乙酸固定液固定 24h, 固定液量约为材料体积的 20 倍。

②流水冲洗 24h 后,将材料放在培养皿中,换水洗 5-6 次。

③用蒸馏水洗 1-2 次。

④把材料移入标本管中加 1%曙红或洋红水溶液中染色约 12h。用苏木精染色(可用4%铁矾作媒染剂)效果也很好。

⑤用蒸馏水把多余染料洗去。在显微镜下观察,如果染色不够深,应重染;过深则可放在 1%-2%的乙酸中分色至合适的程度。

⑥把材料放在培养皿中,加 10%甘油,盖上滤纸,放于通风处蒸发至纯甘油浓度。然后装片、封边即可。

甘油法操作时的注意事项:

(1)蒸发速度不可太快,否则材料易收缩,因此不宜放在过高的温度下。蒸发期间不宜添加 10%甘油,以防材料由于浓度骤变而收缩;

(2)10% 的甘油用量不能少于材料体积的 10 倍,这样在蒸发至纯甘油浓度时仍能浸润材料,小至于干涸;

(3) 封片时,不宜放置材料太多,要互相分开,避免因重叠而影响观察效果。

2 甘油胶法

这种方法与甘油法相似,所不同的是用甘油胶封藏。一些不易收缩的材料,如花粉粒制片常用此法。其优点在于操作方便,而且有利于观察花粉粒的形态。当把制作好的封片在酒精灯上微热,使甘油胶熔化,然后用手轻轻移动盖玻片,此时花粉粒在甘油胶中转动,即可观察到花粉粒的整体形态和特征。

用甘油胶法制作装片时,先把配好的甘油胶(加一些甲基绿)放在温箱中或用热水浴使之熔化,在载玻片上滴一小滴甘油胶,放人新鲜花粉粒或已用甘油脱水透明的材料,然后封藏。

3 二甲苯树胶封藏法

如做表皮整体封藏,可撕取表皮后固定于 FAA 或 70%酒精中,经 50%-30%酒精(每级 1-2min)后放入 1%番红水溶染色液中1h, 再进行酒精系列脱水,经 30%-50%-70%-85%酒精脱水(每级1-2min)后,放人固绿染色液中几秒钟,冉经 95%-100%-100%酒精-1/2纯酒精 +1/2二甲苯(每级1-2min) 后,放人二甲苯中透明,最后用加拿大树胶封藏。

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