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相差显微镜与光学显微镜之间的比较

2020-05-22 | 来源:本网原创
相差显微镜,又叫做相称显微镜,是能将光通过物体时产生的相位差(或光程差)转变为振幅(光强度)变化的显微镜。今天小编来介绍一下相差显微镜在结构上,与光学显微镜的不同之处。

    相差显微镜与光学显微镜的区别

相差显微镜

    相差显微镜是能将光通过物体时产生的相位差(或光程差)转变为振幅(光强度)变化的显微镜。主要用于观察活细胞、不染色的组织切片或缺少反差的染色标本。人眼只能鉴别可见光的波长(颜色)和振幅的变化,不能鉴别相位的变化。而大多数生物标本高度透明,光波通过后振幅基本不变,仅存在相位的变化。相差显微镜基本把透过标本的可见光的光程差变成振幅差,从而提高了各种结构间的对比度,使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发生折射,偏离了原来的光路,同时被延迟了1/4λ(波长),如果再增加或减少1/4λ,则光程差变为1/2λ,两束光合轴后干涉加强,振幅增大或减下,提高反差。


    从结构上看,相差显微镜与普通光学显微镜不同之处在于:

    1.环形光阑具有环形开孔的光阑,安装在光源与聚光器之间,作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥,聚焦到标本上。


    2.相位板相差显微镜在物镜内部增加了涂有氟化镁的相位板,作用是将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。相板上有两个区域,直射光通过的部分叫"共轭面",衍射光通过的部分叫"补偿面"。相位板按工作效果分为两种类型:

    (1)A+相板:将直射光推迟1/4λ,两组光波合轴后光波叠加,振幅加大,标本结构比周围介质更加明亮,形成亮反差(或称负反差)。

    (2)B+相板:将衍射光推迟1/4λ,两组光线合轴后光波相减,振幅变小,标本结构比周围介质更加暗淡,形成暗反差(或称正反差)。带有相板的物镜叫相差物镜,常在物镜外壳上标以"Ph"字样。


    3.合轴调节望远镜

    相差显微镜配备有一个合轴调节望远镜(在外壳上标有"CT"符号),用于调节环状光阑的像与相板共轭面完全吻合,以便实现对直射光和衍射光的特殊处理。使用时拨去一侧目镜,插入合轴调节望远镜,调节合轴调节望远镜的焦点,视野中会呈现两个圆环,分别是明亮的环状光阑圆环与较暗的相板上共轭面圆环。再转动聚光器上的环状光阑的两个调节螺旋,使两环完全重叠。如明亮的光环过小或过大,可调节聚光器的升降旋钮,使两环完全吻合。如果聚光器已升到最高点或降到最低点而仍不能矫正,说明玻片太厚了,应更换。调好后即可取下合轴调节望远镜,换回目镜。


    4.绿色滤光片

    用于调整光源的波长。照明光线的波长不同,会引起相位的变化,为了获得良好的相差效果,相差显微镜要求使用波长范围比较窄的单色光,通常是用绿色滤光片来调整。

    相差显微镜的使用步骤如下:


    ①根据待检标本的性质及要求,挑选适合的相差物镜。

    ②将标本玻片放到载物台上,进行光轴中心的调整。

    ③使用合轴调节望远镜,调整环状光阑与相板上的共轭面圆环完全重叠吻合后,换回目镜。在观察过程中,每次更换物镜倍数时,必须重新进行环状光阑与相板共轭面圆环吻合的调整。

    ④加绿色滤光片,按普通光学显微镜的操作步骤进行观察。

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