荧光显微镜和激光扫描共焦显微镜的相关内容

    1.荧光的技术

    (1)荧光的发生原理

    荧光分子吸收入射光能量后,电子由基态跃迁到激发态。激发态电子不稳定,会自发跃迁回基态,并辐射荧光。辐射荧光λ＜入射光λ。

    (2)荧光的分类

    ①自发荧光:如叶绿素、血红素等荧光分子经紫外线照射后,能够自发辐射红色荧光

    ②诱发荧光:物质经荧光染料染色后,再经紫外线照射,进而辐射荧光。

    2.荧光显微镜的相关内容

    (1)荧光显微镜概述

    荧光显微镜是指利用短波长电磁波为光源,激发样品辐射荧光,之后利用样品产生的自发荧光或诱发荧光,对细胞内特异性蛋白质进行定性与定位研究的装置。

    (2)荧光显微镜的特殊构件

    ①石英透镜

    ②滤光片系统

    激发滤片,位于光源与样品之间,滤过可见光,只允许作为光源的紫外光通过。

    阻断滤片,位于物镜与目镜之间,只允许荧光分子产生的荧光通过。

    (3)荧光显微镜的特点

    ①优点:荧光显微镜主要用于定性、定位研究细胞内特异性蛋白质。可以观察活细胞。

    ②缺点:无法排除来自样品焦平面以外的荧光,使得图像的反差与分辨率降低。

    3.激光扫描共焦显微镜

    (1)激光扫描共聚焦显微镜概述

    激光扫描共焦显微镜是指以激光为光源,对样品进行逐点、逐行、逐面扫描成像的装置。其物镜与聚光镜共焦点,以提高分辨率。通过调节焦平面即可获得样品不同层次的图像,通过计算机分析和模拟,可以构筑样品的三维图像。

    (2)激光扫描共焦显微镜的成像原理

    ①光源为激光,经双色镜反射后,通过物镜汇聚于样品某一焦点,激发荧光。样品所激发的荧光经透镜汇聚成像,通过共焦小孔被检测器检出。

    ②物镜与聚光镜共焦点,使得只有从样品焦平面发出的荧光聚焦成像,其他部分的激发荧光不能通过共焦小孔,检测器不能检出。

    (3)激光扫描共焦显微镜的特点

    ①分辨率比普通荧光显微镜提高1.5倍。

    ②通过改变焦平面,可以获得样品不同层次的图像,从而可以构筑样品的三维图像。

    ③可以实现长时间活细胞动态观察。