透射电子显微镜的样品制备

   下面是透射电子显微镜的进行样品制备的方法：

 （1）超薄切片技术:固定→包埋→切片→染色

    ①固定:使样品的形态、结构与性质尽可能不发生变化。

    固定剂的种类:锇酸、戊二醛、高锰酸钾

    ②包埋:使样品的精细结构在切片中得到支撑,获得的超薄切片连续完整并有足够的强度,耐电子轰击、耐高温、耐真空蒸发。包埋前常需脱水处理。

    包埋剂的要求:

    A.高倍放大时不显示本身结构

    B.聚合时不发生明显收缩

    C.具有良好的机械性能

    包埋剂的种类:环氧树脂

    ③切片:切片厚度的调控通常通过金属热膨胀或机械伸缩。

    ④染色:通常通过重金属盐对样品染色以形成明暗差,得到黑白图像。

    常用重金属盐

    A.锇酸-脂质

    B.铅盐-蛋白质

    C.醋酸铀-核酸

  （2）负染色技术

    负染色技术是指对背景染色的技术。通过用重金属盐对铺展在载网上的样品染色,使电子密度高的重金属盐布满整个载网,而凸出载网表面的样品则没有染料沉积,从而使背景散射电子能力增强,而样品散射电子能力减弱,以此衬托出样品的精细结构。

    负染色技术适合于观察生物大分子组成的结构,如:病毒、核糖体等。

  （3）冰冻刻蚀技术

    冰冻刻蚀技术主要用于观察膜断面表面形貌与膜断面蛋白质,样品无需包埋、固定,能够更好的反应样品的真实结构。

    ①冰冻断裂:在液氮中将样品迅速冷冻,之后在低温、真空环境下用冰刀将其切断。由于断面的冰在真空中少量升华,可以增强刻蚀效果。

    ②刻蚀复型:用金属铂进行倾斜喷涂,以形成电子反差,再用碳垂直于断面进行真空喷涂,形成连续碳膜,以复制样品的表面形貌。再用消化液消除样品本身,之后将之移到载网上用电镜观察。