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切片染料的选择与染色技术,与欲观察的组织和显微镜种类均有关!
2012-06-06 | 来源:
脱水染色:染色(staining)是将切片浸泡于染色液中,让组织与染料结合併产生着色(注2),如此可增强组织在显微镜下的对比效果,方便观察与拍摄。染料依化学性质不同可分为碱性染料(basicdye)与酸性染料(aciddye);依来源可分为天然染料(naturaldye)或综合染料(syntheticdye)。碱性染料带正电荷,可染上组织细胞内带负电荷(酸性)的部分,如染色
脱水染色:
染色(staining)是将切片浸泡于染色液中,让组织与染料结合併产生着色(注2),如此可增强组织在显微镜下的对比效果,方便观察与拍摄。
染料依化学性质不同可分为碱性染料(basic dye)与酸性染料(acid dye);依来源可分为天然染料(natural dye)或综合染料(synthetic dye)。碱性染料带正电荷,可染上组织细胞内带负电荷(酸性)的部分,如染色体、核仁、木质部等;酸性染料则带负电荷,可与细胞内带正电荷之处结合,如细胞质、纤维素等。
染料的选择与染色技术,与欲观察之组织、显微镜之种类及光源均有关,如木质化的细胞壁对番红(Safranin-O)的亲合力较强,韧皮部对速绿(fast green)的亲和力较强,藉此双重染色可得到红绿不同之明显对比;若使用偏光显微镜(polarizing microscope)则其本身之偏光透镜即可产生不同色彩对比之偏光效果,若采用萤光显微镜(fluorescent microscope)则需使用萤光剂进行染色。
一般观察木材切片时可单用番红或以番红与速绿进行搭配染色即可得到良好之观察效果。因此在此介绍番红-速绿双重染色法。
组织与染料的结合方式可分为离子型(ionic)、氢键型(hydrogen bonding)、共价键型(covalent bonding)等。
离子型与氢键型的结合力较弱,所以染后组织容易脱色,而糗颜色随pH值与浓度而异。
共价型染料本身通常可区分为发色团(chromophore)助色团(auxochrome)两部分,反应端的化学分子通常能与羟基、胺基产生反应并结合。
(注3):fast-green在碱性下呈蓝色,可加浓盐酸1至数滴予以调节呈绿色。
(注4):二甲苯可和脱水酒精以及封片胶互溶,可作为此两者之媒介物;如果脱水不完全时,加入二甲苯泽溶液会呈现混浊白色,
因此也可当作脱水完全之指示剂。
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