首页 >
技术资料 > 半薄冰冻切片光学显微镜的使用
半薄冰冻切片光学显微镜的使用
2011-10-07 | 来源：
半薄冰冻切片光学显微镜的使用。半薄的部分，可从cryoprotected生物材料的冷冻块切片在-90°C。光学显微镜的使用这些路段的优点是sub
半薄冰冻切片光学显微镜的使用 。
半薄的部分，可从cryoprotected生物材料的冷冻块切片在-90 ° C。 光学显微镜的使用这些路段的优点是subcellullar形态保存和改进的光学分辨率 。 化学固定的生物材料是cryoprotected浸泡在2.3米，蔗糖和浸泡在液氮中冷冻到标本引脚 。 切片是执行与调整，切较厚部分（0.3至1μm）的ultramicrotome的厚度控制在低温- ultramicrotome。 一旦已取得的部分，他们是从使用蔗糖液滴的刀，但它们置于玻片上，而不是放在标本电网。
玻片上应注明对其中的部分将被放置标记的玻璃，洗，然后外套的玻璃面的钻石铅笔 。 用洗涤剂和水清洗后，他们可能会涂要么明胶，聚- L -赖氨酸或阿尔辛蓝 。 对于这些*，下降1％明胶被涂污在玻璃上使用的是第二张幻灯片和风干的幻灯片 。 对于其他两种方法，见下文。 涂层的幻灯片，可确保部分粘在标签过程的幻灯片。
免疫标记的玻片上的冰冻切片 。
浸入幻灯片，与部分，成Coplin含有PBS JAR。 这将洗去蔗糖。 浸入到用含50毫米氯化铵在为了解渴自由醛基的幻灯片 。 浸入到PBS的幻灯片，包含阻断剂（如1％明胶 ）。 删除的幻灯片，幻灯片等的部分和他们周围的区域保持湿干表面。 重要的是，部分没有干出来的。 把加入10μl-20μL稀释，离心抗体的上部分，在潮湿的气氛中离开15分钟到 24小时。 抗体洗净，用新鲜的PBS（一个Coplin JAR） 。 重复抗体孵育和洗涤步骤与二级fluoresceinated抗体（步骤4和5）。 安装在90％甘油的PBS的幻灯片，或冲洗水和含Moviol或Permount防褪色的化合物挂载。 这将产生一个*性的装载荧光信号是不容易漂白，当暴露在紫外线下 。
与自体荧光的问题
如果所研究的材料是用戊二醛固定，然后自体荧光将出席 。 这可以由0.1％硼氢化钠的PBS（pH值8）治疗的部分被删除。 硼库存解决方案，可以无限期地储存在pH值12 。 在pH 7分子的半衰期为10秒。 在pH 8的半衰期为100秒。 如果从组织的自体荧光，然后金或酶标记的抗体可以取代二次荧光抗体 。 在这样的抗体结合可以可视化使用银增强揭示的黄金，或产生酶细胞化学在组织切片的彩色反应产物。 聚- L -赖氨酸涂层玻片 在100毫升蒸馏水溶解聚- L -赖氨酸10毫克。 保留干净，标志着幻灯片，在这30分钟的解决方案。 无论是空气干燥，不洗或冲洗蒸馏水简要 。
阿尔辛蓝玻片上的涂层 。
0.5％阿尔辛蓝原液 这个解决方案1:100用蒸馏水稀释 在稀溶液中10分钟，浸干净，显着的幻灯片。 简要蒸馏水冲洗幻灯片。 这洗之后，他们将继续略带蓝色 。 晾干后方可使用，并且只使用新鲜配制的幻灯片。
备注：此文章来源英文版本，如翻译有误需原文的请，
责任编辑： 本文来源：
相关文章阅读
相关产品
热门解决方案
热门行业应用
